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在實(shí)驗(yàn)中抗體的挑選辦法你知道多少?
更新時(shí)間:2020-04-15   點(diǎn)擊次數(shù):1456次

1.剖析實(shí)驗(yàn)使用的類(lèi)型 

 

一般抗體闡明書(shū)都列出該抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種剖析類(lèi)型,假如抗體闡明書(shū)沒(méi)有提及的使用類(lèi)型,并不意味著該抗體不適用于此種剖析使用類(lèi)型,而僅是闡明尚未經(jīng)過(guò)此種剖析實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,假如抗體不適用某些剖析實(shí)驗(yàn),則會(huì)在抗體闡明書(shū)上標(biāo)注出來(lái)不適于某剖析實(shí)驗(yàn)。

 

2.樣本的物種

 

應(yīng)挑選物種相同或有穿插反響的抗體,抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有穿插反響,因其氨基酸序列同源性較高,假如樣本的種類(lèi)未列入抗體闡明書(shū)上的穿插反響種屬表中,并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白,而僅僅表明該物種尚未用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò),應(yīng)經(jīng)過(guò)序列比對(duì)的辦法來(lái)猜測(cè)穿插反響,可使用Expasy 和 NCBI BLAST來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。

 

3.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì) 

 

了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于挑選*適宜的抗體,至少兩方面因素需求考慮:

1).待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域:抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來(lái),其中的免疫原包含:全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體(如:細(xì)菌)或細(xì)胞,抗體闡明書(shū)一般都有免疫原的描繪,假如打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域,則必須挑選用含此片段域的免疫原制備出的抗體。

2).樣本的提取或處理進(jìn)程:某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特殊處理,例如:許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本,另一方面,某些抗體僅識(shí)別天然折疊狀態(tài)的蛋白。

 

4.一抗宿主物種的挑選 

 

一般說(shuō)來(lái),在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí),一抗宿主動(dòng)物的物種挑選較為重要,關(guān)于免疫組化而言,盡可能挑選與樣本不同種系物種的一抗,從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白發(fā)生穿插反響

 

5.二抗的挑選

 

二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)歷,主張檢查二抗闡明書(shū)保證該抗體適用于你的檢測(cè)使用, 二抗一般連接熒光素FITC或發(fā)光團(tuán)。

 

6.兩層染色抗體的挑選

 

用未偶聯(lián)一抗進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)物或安排切片的兩層免疫染色要求一抗來(lái)歷于不同物種而且二抗別離識(shí)別其中,二抗闡明書(shū)應(yīng)描繪其與其它物種來(lái)歷的免疫球蛋有否有穿插吸附。

 

7.熒光和化學(xué)發(fā)光符號(hào) 

 

連接于二抗的符號(hào)物是為了檢測(cè)抗體的結(jié)合,挑選符號(hào)物依賴(lài)于幾個(gè)參數(shù):

 

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