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　　一直以來ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。上海酶聯(lián)生物現(xiàn)將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給各位同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。
 

　　下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法。
 

　　一、選擇試劑
 

　　選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
 

　　二、加樣
 

　　1、血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣；
 

　　2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；
 

　　3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
 

　　解決辦法：
 

　　1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
 

　　2、加樣后及時放入孵箱。
 

　　3、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
 

　　4、如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
 

　　5、標(biāo)本較多時，請分批操作。
 

　　三、孵育
 

　　1、孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*;
 

　　2、孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
 

　　解決辦法：
 

　　1、貼封片或加蓋；
 

　　2、按說明步驟嚴格控制操作時間。
 

       四、洗板

 

　　1、采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
 

　　2、采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
 

　　3、反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
 

　　解決辦法：
 

　　1、保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干；
 

　　2、合理安排，或多用幾臺洗板機。
 

　　五、顯色
 

　　1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
 

　　2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
 

　　解決辦法：1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
 

　　2、加樣時保持顯色劑不外流；
 

　　3、A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
 

　　六、終止
 

　　可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
 

　　七、讀板
 

　　如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸；盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
 

　　在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。上海酶聯(lián)生物擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA試劑盒標(biāo)準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。