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ELISA免疫測定,您真的掌握透徹了嗎?
更新時間:2019-03-07   點擊次數(shù):1827次

    ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。ELISA免疫測定,您真的掌握透徹了嗎?不要著急,接著往下看!

ELISA免疫測定目的是?
1.測定體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等;
2.測定激素,包括小分子量的甾體激素等;
3.測定抗生素和藥物;
4.測定病原體抗原,HBsAg、HBeAg等;
5.利用純化的抗原檢測標(biāo)本中的抗體,例如抗-HBs等;

ELISA免疫測定原理:
①使抗原(或抗體)結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性;
②使抗原(或抗體)與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo) 抗原(或抗體),而且此酶標(biāo)抗原(或抗體)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;
③測定時將受檢標(biāo)本(抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應(yīng),再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開,zui后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例;再加入酶反應(yīng)底物后,底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物,根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進行定性或定量分析,以了解被測標(biāo)本中抗體或抗原含量。

ELISA免疫測定步驟:
1.包被;
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔);
3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘;
5.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml;
6.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值。

    注意:引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因有標(biāo)本因素、試劑因素、操作因素。如果您在操作中遇到任何不明白的,不妨來電詳詢本公司業(yè)務(wù)員,我們將為您免費安排技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)(代測、培訓(xùn)、委托加工、定制等)。上海恒遠生物將與廣大工作者一起交流問題,共同提高,讓您成為真正的能手。

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